A549細胞培養(yǎng)說明
一、細胞基本信息
來源:人非小細胞肺癌(NSCLC)組織。
類型:貼壁生長,上皮樣細胞。
應用:常用于癌癥、藥物篩選、毒理學及基因表達研究。
二. 培養(yǎng)基及試劑
基礎培養(yǎng)基:DMEM(高糖)或 RPMI-1640。
添加成分:
10% 胎牛血清(FBS)。
1% 青霉素-鏈霉素雙抗(可選)。
消化試劑 :0.25% 胰酶-EDTA。
三、培養(yǎng)步驟
1、復蘇細胞:
- 快速解凍(37℃水?。?,離心后重懸于培養(yǎng)基,接種于培養(yǎng)瓶。
2、培養(yǎng)條件:
- 37℃、5% CO? 培養(yǎng)箱。
- 每2-3天換液,觀察細胞密度達80%-90%時傳代。
3、傳代操作:
- 棄舊液,PBS清洗。
- 加入胰酶消化1-2分鐘,顯微鏡下確認細胞脫落。
- 加入含血清培養(yǎng)基終止消化,離心后按1:3至1:5比例分瓶。
四、注意事項
污染防控:嚴格無菌操作,定期檢測支原體。
細胞狀態(tài):貼壁不良或空泡增多時需排查培養(yǎng)基或污染。
凍存:使用凍存液(含10% DMSO),逐步降溫后存于液氮。
常見問題:
一旦您在細胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點生成,
首先,要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁,然后,在鏡下觀察培養(yǎng)細胞生長的狀態(tài),黑點是否游動。如果細胞被污染,微生物則會大量繁殖,培養(yǎng)基就會迅速變黃、變混油。污染包括細菌污染、支原體污染等。如果在鏡下現(xiàn)察細胞,生長狀態(tài)良好,與黑點出現(xiàn)前相比,沒有任何變化,那么,黑點的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關:
(1)細胞生長過老,破碎的細胞殘骸:
(2)配制培養(yǎng)基的pH值偏高,不直細胞生長;
(3)培養(yǎng)原代細胞中出現(xiàn)小黑點,可能是原代組織中的雜質,多次傳代可以消除;
(4)血清等級不足以維持細胞良好的生長,更換高等級的胎牛血清。
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