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原代細胞培養(yǎng)應用原代細胞培養(yǎng)越來越多地用作細胞和分子生物學的主要工具,為研究細胞的正常生理學和生物化學(例如,代謝研究、衰老、信號研究),藥物和有毒化合物的作用提供了出色的模型系統(tǒng)。細胞誘變和致癌作用。它也可用于藥物篩選以及大規(guī)模開發(fā)生物化合物(例如,疫苗、治療性蛋白質)。3D細胞培養(yǎng):由于原代細胞是未轉化的且不會永生化,因此它們緊密模擬了活體模型,產生了更具生理意義的結果,可用于模擬3D組織。這些細胞可以作為模型系統(tǒng)來研究細胞生物學和生物化學,研究細胞與致病因子(如細菌、病...
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1細胞的復蘇【概述】復蘇細胞要求快速融化的手段,這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內即融化。避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內形成胞內再結晶對細胞造成損害?!居闷贰颗囵B(yǎng)液、吸管、離心管、培養(yǎng)瓶【步驟】[1]打開水浴鍋,將溫度調至37℃;[2]從液氮中取出凍存的細胞株,用鑷子夾住凍存管(戴防護面罩),迅速置入37℃的水浴鍋中,不斷振搖凍存管,使之盡快融化,要在1-2min內完成復溫;[3]*融化后,取出凍存管,移至超凈工作臺,用75%酒精擦洗消毒,用無菌吸管吸取細胞懸液移至無菌離...
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目前,流式細胞術廣泛應用于細胞表面和細胞內分子表達特征的分析,界定不同種類的細胞群,測定分離出的亞類純度,分析細胞的大小和總量,它可以同時分析單個細胞的多個參數(shù)。它主要用于檢測標記在抗體上的熒光強度,這些熒光抗體則可以檢測與特定細胞分子結合的蛋白或配體,如與DNA結合的溴化丙啶(PI)等。染色步驟包括:將培養(yǎng)的細胞或組織樣品制成單細胞懸液,然后將細胞放入管子或酶標板中與熒光標記或未標記的抗體孵育。之后將細胞放入流式細胞儀中進行分析。懸浮緩沖液中染色的細胞樣品通過流式細胞儀時,...
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對于流式檢測最初的一步就是選擇何種方法,通常是何種熒光物質標記的抗體。廠家根據(jù)需要開發(fā)了各種熒光標記的抗體,進行選擇時首先要滿足的就是所選擇的抗體必須在流式上能夠檢測,各單位買的流式儀功能不*一致,首先要和檢測方進行聯(lián)系,看能否檢測。在附表里我將常用的熒光標記物質的激發(fā)波長和檢測波長給出,可以參考。有幾個原則一起說一下:1、流式檢測時*熒光物質直接標記的抗體,如果沒有直接標記的抗體,用間接發(fā),即二抗上標記熒光分子同樣可以。不過這增加了處理的難度,處理步驟增多,往往會不同程度影...
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免疫熒光單標記和雙標記的方法1.免疫熒光單標記方法免疫熒光單標記是指只標記一種蛋白質分子,方法比較簡單,只要按照染色步驟去做,通常不存在太多的問題。但要注意固定液的選擇,固定液選擇的合適與否,可能會直接影響染色結果。具體染色方法如下。1)所需材料與試劑(1)培養(yǎng)在蓋玻片或玻璃培養(yǎng)皿中融合程度達到60%一70%的細胞。(2)一抗、FITC或TRITC標記的二抗。(3)4%多聚甲醛固定液或冷丙酮固定液(一20℃預冷20min)。(4)封閉液。(5)0.01mol/LPBS緩沖液。...
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目前已知的體外建立耐藥細胞株的方法主要有以下幾種:大劑量藥物沖擊法、藥物濃度遞增法、藥物濃度遞增與大劑量藥物沖擊相結合法、轉基因結合藥物篩選法。其中藥物濃度遞增法和大劑量藥物沖擊法成為臨床建立腫瘤細胞化療耐藥模型的常用方法。①藥物濃度遞增法是指最初使用低濃度的藥物刺激細胞,等待細胞適應低濃度的環(huán)境之后,再略微提高藥物濃度,繼續(xù)等待細胞適應目前的環(huán)境,經過反復的培養(yǎng)和加壓,最終使細胞可以在高濃度的藥物環(huán)境下生存②大劑量藥物沖擊法是在細胞培養(yǎng)時加入超高藥物濃度的藥物,但是孵育的時...
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實驗室培養(yǎng)的細胞種類可以大致分為貼壁細胞和懸浮細胞兩種,只有極少數(shù)類型細胞同時存在兩種狀態(tài)。懸浮細胞是指不需要依賴支持物,可在培養(yǎng)基中以懸浮狀態(tài)生長的一類細胞,如淋巴細胞和大部分血液系統(tǒng)來源細胞。(如小鼠白血病細胞WEHI-3,人白血病細胞K-562,HL-60)。工業(yè)上也有越來越多的貼壁傳代細胞被馴化出來,進行全懸浮的培養(yǎng)。目前在工業(yè)中應用的主要有SP2/0、NS0、CHO、BHK和HEK293細胞等,它們主要用于重組蛋白質生產;在獸用生物制品中常用的傳代細胞主要有采用全懸...
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支原體污染一直是細胞培養(yǎng)的“頭號敵人”,但是支原體的存在卻十分普遍,它的“不請自來”總是讓我們措手不及。世界上有近60%的實驗室正在遭受支原體污染的困擾,今天就讓我們來好好認識這個“刺頭”吧!什么是支原體?支原體結構簡單,具有高度多形性、無細胞壁、增殖緩慢、可在人工培養(yǎng)基中存活并增殖的特點。除此之外,它的“個頭”很小,只有0.1-0.3um,可通過一般的濾菌器。支原體主要以二分裂方式繁殖,亦可以出芽方式繁殖,分枝形成絲狀后斷裂呈球桿狀顆粒。大部分支原體繁殖速度比細菌慢,適宜生...
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