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細胞傳代操作步驟如何

一、貼壁細胞傳代（以一個T25瓶為例）1、吸出原培養(yǎng)液；2、加入2ml左右PBS，輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細胞，吸出PBS丟棄；3、加入1ml左右胰酶，輕輕晃動培養(yǎng)瓶使之浸潤所有細胞，放入培養(yǎng)箱消化；4、消化時間跟據(jù)細胞特性有所不同，顯微鏡下看到細胞塊中間的細胞明顯分離變圓，側立培養(yǎng)瓶細胞可以滑落時可終止消化，全程不要拍打培養(yǎng)瓶；5、加入3ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，吹打細胞使之脫落并在液體里反復吹打使細胞，使之盡量呈單顆細胞的懸浮液，這時可以在顯微鏡看下；6、收集細胞懸液離心，1...

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如何避免細胞污染，千舍有妙招

1.實驗進行前，超凈臺用紫外燈照射30-60min，然后用75%酒精擦拭超凈臺臺面，并開啟超凈臺風機運轉5-10min再開始實驗操作。2.實驗用品用75%酒精擦拭后才能放入超凈臺內；實驗用品用完應移出超凈臺，以利于空氣的流通；實驗完成后用75%酒精擦拭超凈臺臺面。3.每次操作只處理一種細胞；即使不同細胞使用相同的培養(yǎng)基也不要共享同一瓶培養(yǎng)基，避免細胞間的交叉污染。4.操作時小心取用無菌的物品，避免污染。勿碰觸吸管尖頭，不小心碰觸后應立即更換；不要在打開的容器瓶口正上方操作，容...

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胎牛血清的內毒素含量多少為宜？

有下列情況者，對血清內毒素應格外留意篩選：1.養(yǎng)干細胞時，干細胞對內毒素非常敏感，如果血清中內毒素≥3EU/ml時，干細胞很容易死亡。很多使用者，在血清在試用前，就通過提早審核該批次《檢測報告》，以決定是否入圍進行試用。2.養(yǎng)免疫細胞時，過高的內毒素可誘導免疫細胞釋放炎癥因子，抑制小鼠紅細胞集落的形成等。3.基因敲除相關的細胞實驗，培養(yǎng)的細胞要盡可能保持其原始狀態(tài)，任何引導細胞衰老或凋亡的試劑，都會讓后續(xù)的實驗結果“失之毫厘，謬以千里”。在準備血清和其他試劑時，選擇極低的內毒...

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WINSERA®胎牛血清有哪些重要指標

胎牛血清是細胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份，常用于動物細胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。1.提供對維持細胞指數(shù)生長的激素，基礎培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子營養(yǎng)物。2.提供結合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結合或調變它們所結合的物質活力。3.有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合，起到解毒作用。4.是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質上所需因子來源。5.起酸堿度緩沖液作用。6.提供蛋白酶抑制劑，使在細胞傳代時使...

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如何避免細胞的污染

1.實驗進行前，超凈臺用紫外燈照射30-60min，然后用75%酒精擦拭超凈臺臺面，并開啟超凈臺風機運轉5-10min再開始實驗操作。2.實驗用品用75%酒精擦拭后才能放入超凈臺內；實驗用品用完應移出超凈臺，以利于空氣的流通；實驗完成后用75%酒精擦拭超凈臺臺面。3.每次操作只處理一種細胞；即使不同細胞使用相同的培養(yǎng)基也不要共享同一瓶培養(yǎng)基，避免細胞間的交叉污染。4.操作時小心取用無菌的物品，避免污染。勿碰觸吸管尖頭，不小心碰觸后應立即更換；不要在打開的容器瓶口正上方操作，容...

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細胞不貼壁的原因及解決辦法？

細胞培養(yǎng)過程中容易出現(xiàn)這樣或那樣的問題，這些問題都是在細胞生長方面來說，比如細胞的不貼壁、生長緩慢、生長不好，甚至死亡的原因，這些問題使得細胞研究者很是頭疼，下面是針對這些問題的原因和解決方法：一、培養(yǎng)細胞不貼壁可能原因：1.胰蛋白酶消化過度；2.支原體污染；3.培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）；4.細胞老化；5.接種細胞起始濃度太低或太高。解決方法：1.縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度；2.分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物；3...

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細胞傳代操作步驟

一、貼壁細胞傳代（以一個T25瓶為例）1、吸出原培養(yǎng)液；2、加入2ml左右PBS，輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細胞，吸出PBS丟棄；3、加入1ml左右胰酶，輕輕晃動培養(yǎng)瓶使之浸潤所有細胞，放入培養(yǎng)箱消化；4、消化時間跟據(jù)細胞特性有所不同，顯微鏡下看到細胞塊中間的細胞明顯分離變圓，側立培養(yǎng)瓶細胞可以滑落時可終止消化，全程不要拍打培養(yǎng)瓶；5、加入3ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，吹打細胞使之脫落并在液體里反復吹打使細胞，使之盡量呈單顆細胞的懸浮液，這時可以在顯微鏡看下；6、收集細胞懸液離心，1...

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原代細胞如何復蘇？

細胞一般儲存在液氮中，溫度達-196℃，理論上儲存時間是無限的。細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以最大限度的保存細胞活力。細胞復蘇就是要把原本冷凍保存(凍存)著的細胞恢復到一般的生長狀態(tài)，今天我們來看看原代細胞的復蘇步驟。一、檢查收到細胞株包裹時，請檢查細胞株冷凍管是否有解凍情形，若有請立即處理告訴寄方。細胞株請盡速開始培養(yǎng)，或立即冷凍保存(置于–70°C，隔夜后，移到液氮罐保存)。二、冷凍細胞解凍方法一：1、準備好37度水浴鍋，預熱至37度；2、準備好T2...

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